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上海基免生物对全员进行ELISA试剂盒知识培训
点击次数:122 发布时间:2018-11-08 返回

关于做ELISA试剂盒过程中,难免会遇到各种不同的问题,比如标准曲线不好,试剂盒的回收率,假阴性,假阳性,实验的重复性不好等等。现在我司就来一一解答用户们在实验过程中遇到的各种疑问!
ELISA试剂盒曲线问题:
1,与曲线好坏相关,,保证曲线的正常
2,衍生化试剂原因(长时间衍生化试剂变质),更换衍生化试剂 
3.OD值不正常
试剂盒未回温,试剂盒回温到25℃
温度控制不好,控制正确温度
孵育时间不准确,控制孵育时间
洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增 加,洗涤4-5次,每孔250ul,然后拍干
阳光直射,对着风直接吹,避风避
酶标仪的波长错误,酶标仪的波长450nm
抗体的稀释错误,正确的稀释抗体
水质问题,用娃哈哈矿泉水代替
4.白   板
洗涤液配制错误,正确的配制洗涤液
少加液体(错加液体),正确的步骤加液体 
5,仪器试剂原因
离心管未清洗干净,正确的洗涤器具
有机溶剂的影响,做试剂空白看影响结果
6.无 梯 度
标准品也污染,换标准品点板
OD值不正常,控制温度时间在做一次
人为点板,不要点板
7.线 性 不 好
OD值不正常,控制温度时间在做一次
ELISA试剂盒回收率
8.空白管阳性高
样本本身就是阳性样本,换阴性样本做回收率
空白管在实验中被污染,实验中防止交叉污染
水质原因用,娃哈哈矿泉水代替
9.偏  高
添加量不准确,精准的添加量
添加浓度不适合,添加合适的浓度
取液吹干量多,准确的取液吹干
取到其它相层液体,取需用相吹干
复溶液未稀释或加入量少,正确的稀释复溶液
10.偏  低
添加量不准确,精准的添加量
添加浓度不适合,添加合适的浓度
取液吹干量少,准确的取液吹干
复溶液稀释错误或加入量多,正确的稀释复溶液
假阴、阳性
11,水质原因:点复溶液验证,用娃哈哈矿泉水代替
12,实验操作原因
吸取到其它相吹干,准确的取液吹干
离心不彻底,延长离心时间
样本的污染,更换样本
乳化未处理完全,温浴(70℃)处理乳化现象

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